ABCB1(G1199A)基因稳定转染HEK293细胞株的建立

作者：彭锐; 张洪; 张英

来源：中国医院药学杂志, 2015, (23): 2110-2115.

DOI：10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2015.23.11

• P-糖蛋白
• 稳定转染
• 过表达 P-glycoprotein
• stably transfected
• overexpression

目的:将ABCB1(G1199A)突变型和野生型基因分别转入HEK293细胞,建立P-糖蛋白稳定表达细胞株。方法:以野生型ABCB1基因的cDNA为模板质粒,采用PCR点突变的方法合成突变的ABCB1(1199A)基因;在慢病毒的介导下,将实验室构建的pLVX-ABCB1-PGK-Puro和pLVX-ABCB1-mut-PGK-Puro重组质粒转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞;通过流式细胞术检测P-糖蛋白的表达、RT-PCR检测ABCB1基因的转录水平、CCK-8方法测定外源基因对HEK293细胞增殖的影响。结果:流式细胞术证实P-糖蛋白在HEK193细胞中稳定过表达,RT-...

• 出版日期2015
• 单位武汉大学人民医院