改良法分离培养SD新生乳鼠原代心肌细胞

作者：孟香红; 曾斌; 陈慧玲; 李伟东; 李娜; 徐小勇^*

来源：中国应用生理学杂志, 2021, 37(06): 699-704.

• 新生乳鼠
• 原代心肌细胞
• Percoll密度梯度离心
• 化学抑制

目的:建立一种稳定、快速的SD新生乳鼠原代心肌细胞分离培养改良方法。方法:取SD新生乳鼠心室,0.12%Ⅱ型胶原酶消化,Percoll密度梯度离心结合5-溴脱氧尿嘧啶(5-BrdU)化学抑制法纯化心肌细胞,体外培养于含5%马血清的改良DMEM/F12中,次日更换为普通含10%胎牛血清的高糖DMEM继续培养,并比较此改良方法与传统差速贴壁法的差异。结果:改良法获得的心肌细胞生长良好,接种24 h后几乎全部贴壁生长,细胞呈三角形、梭形或不规则形,个别细胞出现自主搏动,频率为10～30 beats/min不等。48 h后心肌细胞变长伸出伪足,部分细胞呈现同步搏动,频率接近50～80 beats/min。72 h后心肌细胞成菊花样交织成网,自发搏动趋于同步,频率加快至80～100 beats/min;96 h后细胞聚集成簇,呈岛屿样,同步搏动频率在100～120 beats/min左右,一周内细胞状态良好。改良法纯化原代心肌细胞的得率((1.17±0.15)×106vs (1.21±0.22)×106,P>0.05)和存活率与传统差速贴壁法相当(93.3%±1.4%vs92.2%±0.7%, P>0.05),但是改良方法获得的原代心肌细胞纯度更高(94.7%±2.1%vs89.5%±1.3%, P<0.05),且用时较短((3.1±0.4)hvs (4.3±0.3)h, P<0.01)。结论:改良法获得心肌细胞耗时短、纯度高、结构功能保存完整,且实验重复和稳定性好,是一种理想且简单易行的的原代心肌细胞分离培养方法。

• 出版日期2021
• 单位宁波卫生职业技术学院; 宁波市医疗中心李惠利医院