带npt-Ⅱ基因转基因水稻快速检测技术的建立

作者：王紫萱; 易自力; 王志成; 蒋建雄; 覃静萍; 张昊; 谭炎宁

来源：遗传, 2007, (04): 499-507.

DOI：10.16288/j.yczz.2007.04.022

• 转基因水稻
• npt-Ⅱ基因
• G418
• 快速检测

以转溶菌酶基因水稻纯系材料中花9号(ZH9(R))及其受体品种中花9号(ZH9(CK))为材料,以ZH9(R)中携带的npt-Ⅱ基因作为辅助筛选标记,利用抗生素对其进行处理,建立了一套快速检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的技术体系。使用不同浓度的卡那霉素(Kanamycin,Kan)和G418溶液将ZH9(R)和ZH9(CK)成株离体叶片于室内室温下置于培养皿中浸泡处理,通过观察叶片变化,确定G418为检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的最佳抗生素,将G418(溶液)80mg/L浓度(处理4天)作为检测该类转基因水稻成株离体叶片的临界浓度。进一步用G418对ZH9(R)和ZH9(CK)种子、幼胚和幼苗进行了不同处理。确定:(1)G418(溶液)300mg/L浓度(处理7天)作为检测该类转基因水稻种子的临界浓度;(2)G418(1/2MS+0.5mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)200mg/L浓度(处理10天)作为检测该类转基因水稻幼胚的临界浓度;(3)G418(1/2MS+0.5mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)150mg/L浓度(处理12天)作为检测该类转基因水稻幼苗的临界浓度,并且通过PCR方法证实了上述结论。将这些结论应用于ZH9(R)转育后代叶片、种子、幼胚和幼苗群体的检测,检测效果都非常明显。这为带npt-Ⅱ基因转基因水稻建立了一套简便、直观且准确的检测方法。

• 出版日期2007-4-30
• 单位湖南农业大学