口蹄疫病毒VP2蛋白特异性单克隆工程抗体的表达与活性鉴定

作者：王省; 李坤; 卢曾军; 刘在新; 李冬; 包慧芳; 李平花; 孙普; 白兴文; 陈应理; 付元芳; 张婧; 马雪青; 曹轶梅^*

来源：中国兽医科学, 2019, 49(08): 939-946.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0108

• 口蹄疫病毒
• 单个B细胞抗体技术
• 单克隆工程抗体
• 衣壳蛋白VP2

为了在牛上应用单个B细胞抗体技术制备口蹄疫病毒(FMDV)特异性单克隆抗体,本研究利用生物素标记O型FMDV 146S抗原,从免疫牛外周血单个核细胞(PBMCs)中分选单个抗原特异性B细胞,通过单个B细胞抗体基因测定,获得Ig G抗体重链与轻链可变区编码序列,将可变区基因插入含有牛Ig G抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建完整Ig G抗体的表达质粒。将表达质粒转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞(CHO-S)进行抗体表达与纯化。经病毒中和试验(VNT)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、Western-blot验证抗体的生物活性。结果显示,获得了4株FMDV特异性单克隆工程抗体,其中2株(A35、B57)可以中和O型FMDV;2株(A7、E32)IFA检测为阳性,其中E32可特异性结合O型和A型FMDV两种抗原,但没有病毒中和活性;ELISA结果显示,E32具有较好的亲合力;Western-blot结果显示,E32可特异性结合衣壳蛋白VP2,说明在衣壳蛋白VP2存在型间保守的抗原位点,为通用型FMDV抗原检测方法的研究提供了材料。

• 出版日期2019
• 单位中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室