丝状噬菌体pⅧ展示系统表达赭曲霉毒素A模拟表位及应用研究

作者：陈兴龙; 徐玲; 刘仁荣; 裘雪梅; 朱立鑫

来源：卫生研究, 2012, 41(05): 814-818.

DOI：10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2012.05.026

• 噬菌体展示
• 噬菌粒
• 赭曲霉毒素A
• 酶联免疫吸附测定

目的传统赭曲霉毒素A(OTA)竞争抗原毒性强、成本高、制备难度大。将OTA模拟表位展示于丝状噬菌体pⅧ表面,获得无毒、易于制备的OTA竞争抗原替代物。方法构建带有OTA模拟表位的重组噬菌粒pC89-COTA,为了提高OTA模拟表位与抗体的结合率,在OTA模拟表位序列5'端引入了肠激酶酶切位点。噬菌粒转化进大肠杆菌XL1-blue后再经野生KM13噬菌体感染,获得带有OTA模拟表位的重组噬菌体。用该噬菌体代替竞争抗原建立OTA的无毒ELISA分析方法。结果成功表达出带有OTA模拟表位的重组噬菌体,经肠激酶酶切的OTA模拟表位噬菌体与OTA抗体的结合效率显著高于未酶切的噬菌体。利用酶切后的噬菌体建立OTA的无毒ELISA分析方法,其最低检出限为100pg/ml,线性范围为250pg/ml～1000pg/ml。进行加标回收实验,回收率为99.8%～112.3%,相对标准偏差为8.19%～11.64%,测试16份市售样品,阳性率为31.25%。结论成功表达了OTA模拟表位噬菌体,建立了OTA的无毒ELISA检测方法。

• 出版日期2012
• 单位江西科技师范大学