大鼠Kir6.2基因真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

作者：任晓燕; 谭淑慧; 马国诏; 杜怡峰

来源：山东大学学报(医学版), 2011, (02): 24-28.

• 阿尔茨海默病
• 质粒
• 基因,Kir6.2
• HEK293细胞 Alzheimer disease
• Plasmids
• Genes,kir6.2
• HEK293 cell

目的克隆Kir6.2基因,构建真核表达载体pcDNA3.0/Kir6.2,将重组质粒转染HEK293细胞获得高表达Kir6.2基因的细胞克隆。方法从SD大鼠脑组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得Kir6.2基因的全长cDNA,插入T1-simple克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pcDNA3.0,利用脂质体将重组质粒转染HEK293细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,采用RT-PCR和Western blot方法,鉴定Kir6.2基因在HEK293细胞中的过表达。结果经PCR和DNA序列测定证实,目的基因已插入重组质粒,RT-PCR和West-ern blot证明,经G418筛选得到的转基因HEK293细胞克隆中存在Kir6.2基因的表达。结论成功构建Kir6.2基因的真核表达载体,获得稳定表达Kir6.2基因的HEK293细胞克隆。

• 出版日期2011
• 单位山东大学