UCA1a(CUDR)基因真核表达载体的构建及其在膀胱癌UM-UC-2细胞中的表达

作者：王宇; 陈葳; 李旭; 张红; 张晓芹; 史迎莉

来源：吉林大学学报(医学版), 2014, 40(03): 504-507.

DOI：10.13481/j.1671-587x.20140308

• UCA1a(CUDR)基因
• 真核表达载体
• 转染
• UM-UC-2细胞系

目的:构建UCA1a(CUDR)基因真核表达载体pcDNA-UCA1a(CUDR),观察其在膀胱癌UM-UC-2细胞中的表达,为研究UCA1a(CUDR)基因与膀胱癌的关系提供实验依据。方法:以膀胱癌BLZ-211细胞的5′-RACE-Ready cDNA为模板,采用PCR法克隆UCA1a(CUDR)全基因,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA-UCA1a(CUDR)重组质粒。双酶切及测序鉴定后,稳定转染至体外培养的人膀胱癌UM-UC-2细胞系,利用RT-PCR法检测转染pcDNA-UCA1a(CUDR)的UM-UC-2细胞和转染空质粒pcDNA3.1(+)的UM-UC-2细胞中UCA1a(CUDR)基因的表达。结果:克隆的目的基因片段约为2 200bp,与预期结果相符,表明成功扩增UCA1a(CUDR)基因;经双酶切及测序鉴定,成功构建真核表达载体pcDNA-UCA1a(CUDR)。半定量RT-PCR法检测,与转染空质粒的细胞比较,转染表达载体pcDNA-UCA1a(CUDR)的UM-UC-2细胞中UCA1a(CUDR)基因表达量升高。结论:成功构建pcDNA-UCA1a(CUDR)真核表达载体,且UCA1a(CUDR)基因在转染表达载体的UM-UC-2细胞中高表达。

• 出版日期2014
• 单位陕西中医药大学; 西安交通大学