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摘要
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)诱导对人翼状胬肉成纤维细胞血管生成拟态(VM)的影响.方法 收集在广州市增城区人民医院行翼状胬肉手术的6例新鲜的初发性人翼状胬肉标本(年龄41~58岁).将人翼状胬肉新鲜组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养,并采用波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色和广谱细胞角蛋白(CK)染色对人翼状胬肉成纤维细胞进行鉴定.分别设置对照组和不同浓度的VEGF(1 ng/ml、10 ng/ml及100 ng/ml)组,取生长良好的3~5代翼状胬肉成纤维细胞进行分组培养.采用细胞计数试剂盒-8法检测各组成纤维细胞的增殖能力.应用细胞三维培养技术和糖原染色法观察各组VM的进展情况,采用蛋白质印迹法检测各组细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达.各组吸光度(OD值)、MMP-2及HIF-1α的描述均采用均数±标准差(x-±s)表示,对照组与不同浓度VEGF组的比较采用单向方差分析,当差异有统计学意义时,进一步两两比较.双变量相关性分析采用Spearman's等级相关分析.结果 人翼状胬肉成纤维细胞鉴定结果 显示,细胞爬片经苏木精-伊红染色后,在显示镜下细胞呈长梭形、三角形、扇形或不规则状.细胞免疫化学染色结果 显示,细胞的胞浆呈Vimentin阳性表达,广谱CK阴性表达.细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖结果 显示,对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的OD值分别为0.57±0.023、0.59±0.012、0.77±0.024及1.014±0.035.对照组和1 ng/ml组比较差异无统计学意义(t=1.21,P> 0.05);10 ng/ml组和100 ng/ml组的OD值均明显高于对照组和1 ng/ml组(t=14.78,12.34;P <0.05);100 ng/ml组的OD值最高,与对照组、1 ng/ml组及10 ng/ml组比较,差异有统计学意义(t=20.12,19.45,13.41;P <0.05).细胞三维培养及糖染色显示,10 ng/ml组和100 ng/ml组均出现VM结构,而对照组和1 ng/ml组未发现VM结构.10 ng/ml组和100 ng/ml组VM结构的密度分别为4.40±1.14和12.40±2.07,差异有统计学意义(t=-7.899,P <0.05).对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的MMP-2值分别为0.26±0.038、0.29±0.013、0.39±0.013及0.73±0.014;对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的HIF-1α值分别为0.087±0.0086、0.087±0.0031、0.15±0.0016及0.37±0.026.对照组和1 ng/ml组中MMP-2和HIF-1α灰度值的差异均无统计学意义(t=1.21,0.01;P> 0.05);10 ng/ml组中MMP-2和HIF-1α灰度值均显著高于对照组和1 ng/ml组(t=7.92,6.85,17.64,17.82;P <0.05);100 ng/ml组的中MMP-2和HIF-1α灰度值均显著高于其他3组(t=28.48,26.45,18.72,25.31,24.78,15.45;P <0.05).翼状胬肉成纤维细胞的血管生成拟态密度与MMP-2和HIF-1α表达呈显著正相关(r=0.509,0.503;P <0.05).结论 VEGF能够增强人翼状胬肉成纤维细胞的增殖能力、促进VM出现及促使MMP-2和HIF-1α表达增高.提示VEGF因素可能是翼状胬肉出现VM的分子机制,并协同增强MMP-2和HIF-1α表达一起影响翼状胬肉的进展.
- 出版日期2017
- 单位中山大学
