益糖康通过抑制AGE/RAGE信号通路改善骨骼肌细胞凋亡的机制

作者：于嘉祥; 张瀚文; 王列; 石岩; 于睿; 戴俭宇; 曲超; 马贤德; 韩雪莹; 王智民; 安继仁; 程玥凤; 纪泓楷; 张文顺^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 29(13): 54-64.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231696

• 益糖康
• 胰岛素抵抗
• 糖基化终末产物(AGE)/糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路
• 改善
• 机制

目的：研究益糖康通过抑制糖基化终末产物(AGE)/糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路纠正骨骼肌细胞过度凋亡进而改善胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法：(1)体外实验，制备益糖康含药血清，将C2C12细胞设置空白组、模型组、益糖康含药血清高、中、低剂量(40、20、10 g·kg-1)组、RAGE抑制剂组，除空白组外，用棕榈酸诱导C2C12 IR模型细胞，然后分别采取相应的干预方式后检测各组细胞的活性及葡萄糖消耗量水平，用流式细胞术检测各组细胞凋亡率，实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测重要凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p53、胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9]的mRNA及蛋白表达水平。(2)体内实验，将96只符合研究标准的Wistar大鼠设置空白组、对照组、益糖康高、中、低剂量组(40、20、10 g·kg-1)、吡格列酮(1.35 mg·kg-1)组，运用高糖高脂糖尿病模型诱导饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立胰岛素抵抗动物模型并运用高胰岛素-正常血糖钳夹(HEC)实验验证，模型判定成功后对各组大鼠按要求进行灌胃给药干预。用原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠骨骼肌组织阳性凋亡细胞个数，Real-time PCR及Western blot技术检测Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平。结果：(1)体外实验，与空白组比较，模型组C2C12细胞凋亡率显著升高，细胞活性、葡萄糖消耗量均显著降低(P<0.01)。与模型组比较，益糖康含药血清各剂量组和RAGE抑制剂组C2C12细胞凋亡率显著降低，细胞活性、葡萄糖消耗量均显著升高(P<0.01)；与模型组比较，益糖康含药血清各剂量组和RAGE抑制剂组C2C12细胞凋亡率显著降低，细胞活性、葡萄糖消耗量均显著升高(P<0.01)。与空白组比较，模型组C2C12细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低，Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较，益糖康含药血清各剂量组和RAGE抑制剂组C2C12细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。(2)体内实验，与空白组比较，模型组大鼠骨骼肌组织阳性凋亡细胞个数显著升高(P<0.01)。与模型组比较，益糖康高、中、低剂量组，吡格列酮组大鼠骨骼肌组织阳性凋亡细胞个数显著降低(P<0.01)。与空白组比较，模型组大鼠骨骼肌组织Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低，Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较，益糖康各剂量组和吡格列酮组大鼠骨骼肌组织Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。益糖康中剂量具有RAGE抑制剂类似的功效，且疗效等同于盐酸吡格列酮。结论：益糖康可能通过抑AGE/RAGE信号通路抑制骨骼肌细胞凋亡。

• 出版日期2023
• 单位辽宁中医药大学附属医院; 辽宁省中医药研究院; 辽宁中医药大学