铁皮石斛SCoT-PCR反应体系构建及优化

作者：赵瑞强; 高燕会; 章晓玲; 斯金平

来源：核农学报, 2012, (04): 648-655.

• 铁皮石斛
• SCoT
• 正交设计
• 单因素试验
• 体系优化 Dendrobium officinale Kimura et Migo
• SCoT
• orthogonal design
• single factor experiment
• system optimization

采用正交设计和单因素试验相结合的方法,对铁皮石斛的SCoT-PCR反应中5个因素(DNA模板、Mg2+、dNTPs、Taq酶和引物)进行优化试验。建立了适合铁皮石斛既稳定且多态性高的SCoT-PCR的最佳反应体:20μl PCR反应体系中含有1×Buffer、30ng DNA模板、2.5mmol.L-1Mg2+、0.15mmol.L-1dNTPs、1.5U Taq DNA聚合酶和0.4μmol.L-1引物。对铁皮石斛的SCoT-PCR最佳反应体系的退火温度进行梯度试验,发现本试验引物S6的退火温度为54.5℃,且最适退火温度因引物而异。这一优化的SCoT-PCR反应体系在32份铁皮石斛材料的验...

• 出版日期2012
• 单位浙江农林大学