抗逆大豆IND-ΦΦ41Φ-5转化体特异性定性PCR检测方法的建立及其标准化

作者：肖芳; 李允静; 武玉花; 李俊; 高鸿飞; 翟杉杉; 吴刚^*; 梁晋刚^*

来源：中国油料作物学报, 2023, 1-9.

DOI：10.19802/j.issn.1007-9084.2023043

• 转基因
• 抗逆大豆IND-ΦΦ41Φ-5
• 转化体特异性
• 定性PCR

抗逆大豆IND-ΦΦ41Φ-5已经批准获得我国进口用作加工原料的安全证书，含有外源HaHB4基因和bar标记基因。本研究根据抗逆大豆IND-ΦΦ41Φ-5转化体5’端和3’端插入位点旁侧序列信息，设计19对引物，结合罗萨里奥农业生物技术学院公司的1对引物，针对20对引物组合利用定性PCR技术进行引物特异性筛选，结果显示5’端的14号引物特异性良好，优化后获得最佳反应体系和反应程序；经测试，该引物特异性好、稳定性高，检出限达0.1%，扩增片段大小248 bp。经8家有资质实验室对本方法的特异性、检出限、重复性和再现性进行验证，各项参数均达到国家标准要求。本研究成功建立了抗逆大豆IND-ΦΦ41Φ-5转化体定性PCR检测方法，为IND-ΦΦ41Φ-5转化体在国内的安全监管提供技术支撑。

• 出版日期2023
• 单位中国农业科学院油料作物研究所