AKT2基因的过表达抑制H_2O_2诱导的乳腺癌细胞凋亡

作者：凌彩虹; 兰风华; 韩俊勇; 董荔红; 黄俏佳

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2011, (11): 1044-1050.

• 人蛋白激酶B&beta
• 基因克隆
• RNA干扰
• 基因转染
• H2O2
• 细胞凋亡 protein kinase B beta(Akt2)
• gene cloning
• RNA interference
• gene transfection
• H2O2
• cell apoptosis

研究AKT2基因对H2O2诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响.RT-PCR扩增人AKT2基因全长cDNA序列后克隆入pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒中,构建AKT2基因的真核表达载体(野生型,WT-AKT2);应用QuikChange定点诱变,制备AKT2激酶活性丧失的负性表达载体(DN-AKT2).WT-AKT2和DN-AKT2分别转染人乳腺癌MCF-7细胞,新霉素筛选稳定转染细胞克隆;设计并合成针对人AKT2基因2个不同部位的siRNA片段,转染入同样的细胞.通过TUNEL和DNA ladder测定,研究转染AKT2基因及AKT2 siRNA前后细胞对H2O2诱导凋亡的抵抗作用.测序鉴定证实,WT-AKT2和DN-AKT2表达载体构建成功.Western印迹结果显示,WT-AKT2和DN-AKT2基因在MCF-7细胞中表达良好,而AKT2 siRNA则可有效地抑制AKT2的表达;TUNEL和DNA ladder测定结果表明,WT-AKT2表达上调的稳定克隆组,可显著提高MCF-7细胞对H2O2诱导的凋亡的抵抗作用(转染DN-AKT2具相反作用).经H2O2作用后,其凋亡细胞数显著低于空载体稳定转染克隆及未转染亲代细胞的,差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者之间差异无统计学意义(P>0.05).AKT2抑制乳腺癌细胞对H2O2诱导凋亡的作用可被AKT2 siRNA和PI3K/AKT信号途径抑制剂wortmannin所阻断.内源性的结果进一步证明了AKT2的功能.本研究表明,AKT2能够抑制H2O2诱导的MCF-7人乳腺癌细胞凋亡,可能成为乳腺癌治疗的靶点之一,并为研究乳腺癌细胞抵抗活性氧诱导的细胞凋亡的分子机制奠定了基础.

• 出版日期2011
• 单位中国人民解放军南京军区福州总医院