牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的原核表达与纯化

作者：文征宇; 侯文韬; 杨龙雨; 陈鹏

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2011, (03): 49-53.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2011.03.002

• 牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ
• 原核表达
• 蛋白纯化 vaccinia virus topoisomeraseⅠ
• prokaryotic expression
• protein purification

【目的】建立牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ(Vaccinia topoisomeraseⅠ)的原核表达体系及纯化方法,以获得高活性、高纯度的牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ。【方法】优化并人工合成牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的全基因序列,构建牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的原核表达载体(pET28a/TOPO)并转化E.coliBL21 Star(DE3)菌株,优化其诱导表达条件,表达蛋白经Talon his-tag purification resin螯合层析柱纯化,用SDS-PAGE鉴定纯化效果,借助酶切质粒pLLP-OmpA检测纯化蛋白的活性。【结果】转化pET28a/TOPO的E.coliBL21 Star(DE3)特异地表...

• 出版日期2011
• 单位西北农林科技大学