抗mEET蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及mEET组织学分布的分析

作者：邵启祥; 金容; 钱晓萍; 张君; 张毓; 陈慰峰

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2006, 26(01): 41-46.

DOI：10.3760/j:issn:0254-5101.2006.01.011

• 小鼠雌激素增强的转录子
• 单克隆抗体
• 组织学分布

目的制备抗小鼠雌激素增强的转录子(mouse estrogen-enhanced transcript,mEET)的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),探讨mEET蛋白在小鼠各组织器官中的定位与分布,为进一步了解和研究mEET功能奠定基础。方法以纯化的原核表达mEET蛋白免疫的SD大鼠脾细胞与Sp2/0融合,经HAT筛选获得稳定分泌抗mEET蛋白的McAb的杂交瘤。采用McAb通过免疫组织化学及间接免疫荧光染色分析mEET在胸腺上皮细胞系MTEC1及各组织器官中的定位与分布。结果获得4株能高效分泌特异性McAb的抗mEET的杂交瘤细胞系DA10、DB4、4A5和4D8,Ig亚类均为IgM,其腹水效价为1∶107~1∶108。Western blot结果表明该抗体能特异性识别原核表达的mEET蛋白,免疫荧光及免疫组化显示mEET蛋白在胞浆点状弥散分布,部分细胞可见核内分布。免疫组化提示该蛋白在全身多个器官有表达,尤其在骨髓中的巨核细胞胞浆中高表达。结论成功获得抗mEET的特异性的单克隆抗体,为进一步研究mEET的功能及在胸腺发育中的作用创造了条件。

• 出版日期2006
• 单位北京大学; 江苏大学