柯萨奇病毒A组16型纯化液超滤浓缩工艺的探索

作者：田华平; 常伟琪; 陈璐; 陆晓伟; 刘碧云; 张浩然; 徐华; 姜莉^*; 杨二霞^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(11): 1280-1284.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003199

• 柯萨奇病毒A组16型
• 纯化液
• 超滤浓缩
• 抗原回收率
• 蛋白含量
• 膜通量

目的探索柯萨奇病毒A组16型(coxackievirus A16,CA16)纯化液在小试条件下的最适超滤浓缩参数,并验证其在放大规模工艺中的适用性。方法制备CA16灭活纯化液,在小试条件下,对CA16纯化液进行超滤浓缩,比较采用不同截留分子量(10、30及100 KD)的超滤膜,以不同加液方法(恒体积及补液法)、浓缩倍数(10、20、30及50倍)、上样浓度(原倍、2及4倍稀释)及洗膜次数(1～5次)条件下浓缩样品的抗原回收率、蛋白含量和膜通量,筛选最适参数;应用此参数进行放大规模的3批CA16纯化样品超滤浓缩,验证其适用性。结果在小试条件下,截留分子量100 KD的超滤膜较30、10 KD的抗原回收率及蛋白含量均相近,但膜通量提升16%和100%;恒体积法较补液法浓缩样品的杂蛋白去除率提升约2倍,膜通量提高58%;10倍浓缩的样品回收率较30及50倍浓缩样品高10%～15%,蛋白含量较其他浓缩倍数低2～4倍;稀释上样与原倍上样的浓缩样品相比,抗原回收率和膜通量均无明显变化;膜表面多次洗涤可显著提高抗原回收率,但洗涤3次后即达峰值。在放大规模条件下,3批CA16纯化液抗原回收率均值为92.3%,蛋白含量均值为86.54μg/mL,膜通量均值为141.5 L/(m2·h)。结论在小试条件下,采用截留分子量为100 KD的超滤膜,以恒体积法对原倍CA16病毒纯化液进行10倍浓缩,同时洗膜表面3次,可获得更高通量及抗原回收率且较低蛋白含量的浓缩样品;此条件在放大规模条件下亦适用。

• 出版日期2020