单标记延伸结合荧光偏振技术快速检测B型流感亚系方法的建立及应用

作者：王敬忠; 房师松; 刘涛; 王昕; 程小雯; 张仁利; 程锦泉

来源：华南预防医学, 2013, 39(04): 82-85.

DOI：10.13217/j.scjpm.2013.04.082

• 流感病毒,B型
• 脱氧核糖核苷酸
• 荧光偏振技术

目的建立一种单标记延伸(OLE)结合荧光偏振技术(FP)快速检测B型流感By和Bv亚系的新方法。方法从GenBank下载By和Bv血凝素(HA)基因各50条序列,通过MEGA软件进行分析,利用Primer Premier 5.0设计B型流感病毒亚系特异性引物和单标记延伸引物,RT-PCR扩增目的片段,用OLE引物添加亚系特异性荧光标记的双脱氧核糖核苷酸,建立单碱基延伸终止荧光偏振检测方法。结果 RT-PCR扩增产物的大小分别为349、397和713 bp。OLE sense引物检测Bv亚系双脱氧三磷酸胸苷(ddTTP)的FP值高于双脱氧三磷酸胞苷(ddCTP)的FP值(P<0.01),而By亚系则正好相反,ddCTP的FP值高于ddTTP(P<0.01);OLE anti-sense引物检测Bv亚系和By亚系ddGTP和ddATP的FP值均差别不大(均P>0.05)。Bv样品毒株ddTTP的FP值均值为(159±10)mp,与Bv参照株(162 mp)相近;By样品毒株ddCTP的FP值均值为(163±10)mp,与By参照株(165 mp)相近。结论该方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,适合于流感监测实验室对流感病毒的快速分子诊断。

• 出版日期2013
• 单位深圳市慢性病防治中心; 深圳市疾病预防控制中心