超高效液相色谱-串联质谱法定量检测蜂王浆主蛋白1～3

作者：陈勇; 江唯健; 王加俊; 张帆; 沈立荣^*

来源：浙江大学学报(农业与生命科学版), 2022, 48(06): 776-786.

• 蛋白质组学
• 超高效液相色谱-串联质谱法
• 王浆主蛋白标志多肽
• 蜂王浆
• 新鲜度
• 检测方法

为建立精准的蜂王浆新鲜度检测方法，利用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem quadrupole-time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS)对经胰蛋白酶酶解的蜂王浆中王浆主蛋白(major royal jelly proteins,MRJPs)进行定性分析，并通过蛋白质组学分析平台比对，鉴定出8种王浆主蛋白(MRJP1～7和MRJP9)的一级序列数据，然后按同时具备高易酶解性与酶解后高稳定性的标准筛选得到3个特异性标志多肽，包括MRJP1多肽YNGVPSSLNVISK、MRJP2多肽TLQMIAGMK、MRJP3多肽LTVAGESFTVK。分别合成MRJP1～3的3条特异性标志多肽标准品及其同位素标志肽，建立蜂王浆中MRJP1～3的超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(ultra-high performance liquid chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry,UPLC-TQMS)定量检测方法。采用UPLC-TQMS分别检测蜂王浆样品中MRJP1～3含量发现，MRJP1多肽在10～1 600 ng/mL范围内具有良好的线性关系，MRJP2和MRJP3多肽在10～600 ng/mL范围内均具有良好的线性关系，决定系数(R2)均大于0.99。最后，通过分析蜂王浆中MRJP1～3随加温老化时间的降解程度，证实MRJP1～3的降解率均与老化时间(40℃)呈正相关(R2>0.9)。说明本研究所建立的MRJP1～3检测方法具有高度特异性，可为蜂王浆质量评价提供技术支撑。

• 出版日期2022
• 单位浙江大学