基于细菌体系生产双链RNA的条件优化

作者：计慧君; 林羿光; 付彤煜; 郑思春^*

来源：环境昆虫学报, 2023, 45(03): 703-710.

• 双链RNA
• RNA农药生产
• 细菌体系
• RNA提取

化学杀虫剂是农业害虫防治的主要手段，然而农业害虫已对化学杀虫剂产生了抗药性。RNA农药的应用将是减少使用化学杀虫剂的一种途径。RNA农药具有专一、高效、易降解和对环境友好等优点而受到了关注，但在靶标分子、靶标分子的双链RNA(dsRNA)生产工艺和应用制剂等方面仍需进一步研究。本研究以褐飞虱Nilaparvata lugens蛋白激酶B基因的dsRNA(dsNlAKT)为例，对利用细菌体系生产dsRNA的方法进行了探究。将NlAKT构建进L4440载体后，将其转化到缺乏核酸酶(RNaseⅢ)的大肠杆菌Escherichia coli HT115(DE3)中，进行了dsRNA生产条件的测试。结果表明：(1)当异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)工作浓度为0.1 mM或0.5 mM时dsRNA的产量没有明显变化，而当其工作浓度增加至1 mM时dsRNA产量明显减少；(2)在IPTG诱导时间为2～8 h范围内，添加IPTG后诱导6 h获得的dsRNA产量最多；(3)在实验室常规提取RNA方法中，增加低剂量溶菌酶预处理这一步骤可增加提取产物中dsRNA的含量。试验结果证明了采用工作浓度为0.1 mM的IPTG诱导6 h的生产条件，并在提取过程中增加溶菌酶的预处理步骤有助于获得较高的dsRNA含量。研究结果为RNA农药的生产条件提供了实验依据。

• 出版日期2023
• 单位华南师范大学; 梅州市华师昆虫发育生物学与应用技术重点实验室广梅园研发中心