Na_v1.2IQ及其癫痫突变体的表达纯化和活性鉴定

作者：郑敏; 王千慧; 封瑞; 李智; 马中女; 孙威; 毛楠; 高青华; 郝丽英; 郭凤

来源：解剖科学进展, 2016, 22(02): 176-178+182.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2016.02.017

• 钙调蛋白
• pull-down
• 突变体
• 癫痫

目的构建电压门控性钠通道亚型Na_v1.2IQ片段及其癫痫突变体的质粒,制备高浓度和高纯度的体外重组蛋白并进行活性鉴定。方法将Na_v1.2 IQ片段及癫痫突变体的cDNA插入pGEX-6p-1质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导Na_v1.2 IQ片段及癫痫突变体GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化。应用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量;采用Bradford方法测定GST蛋白浓度;应用pull-down法检测纯化后蛋白的活性。结果 Na_v1.2IQ片段及其癫痫突变体在体外大肠杆菌中具有较高的纯度和表达量,与钙调蛋白在体外能够直接结合,证明制备的蛋白片段具有一定活性。结论成功分离纯化了稳定高效的体外重组Na_v1.2IQ及其癫痫突变体蛋白,为研究Na_v1.2与相关调节因子在癫痫发病的作用提供理论依据。

• 出版日期2016
• 单位中国医科大学; 沈阳二四二医院