抗鸡传染性法氏囊病病毒单链抗体库的构建及其中和抗体的筛选

作者：周兵; 李天鹤; 李宁; 徐黎明; 郭茉; 马蕾; 张瑛杰; 叶贤龙; 赵景壮; 衣春霖; 韩晓辉; 丁良君; 李德山

来源：中国预防兽医学报, 2014, 36(03): 227-231.

• IBDV
• 细菌展示
• 单链抗体
• 中和活性

为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的细菌展示单链抗体(scFv)库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv。本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增鸡抗体的VH和VL编码序列,插入含有(Gly4Ser)3linker的pTlinker载体中,再将VH-linker-VL片段亚克隆到细菌展示载体pBSD中。以FITC标记的VP2蛋白为诱饵,通过流式细胞术筛选出5株阳性scFv,其氨基酸同源性为82.16%87.27%。将5株scFv基因分别插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达质粒pET-IBDV-scFv。将其转化大肠杆菌Rosetta进行诱导和表达,该5株scFv相对分子质量均约为28 ku。此外,利用纯化的scFv包被于ELISA检测板中作为扑捉抗体,检测结果显示scFv对VP2蛋白和不同IBDV株均具有特异性结合能力。而且通过体外中和试验结果表明,仅有一株scFv具有病毒中和活性,可以有效阻断IBDV(B87株)对鸡胚成纤维细胞(DF1)的感染。该研究结果为进一步研制IBDV治疗性抗体奠定了基础。

• 出版日期2014
• 单位中国科学院大学; 国家知识产权局; 生命科学学院; 东北农业大学; 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所