电针夹脊穴和督脉穴对急性脊髓损伤家兔后肢神经功能的影响及其作用机制

作者：杜伟斌; 陈荣良; 俆亦生; 全仁夫; 胡华辉; 鲍关爱

来源：中医正骨, 2016, 28(12): 13-20.

• 脊髓损伤
• 电针
• 穴,夹脊
• 穴位,督脉
• 神经干细胞
• 神经传导
• 兔
• 动物实验

目的:观察电针夹脊穴和督脉穴对急性脊髓损伤家兔后肢神经功能的影响,并探讨其作用机制。方法:采用随机数字表将60只新西兰家兔随机分为假手术组、模型组、电针组,每组20只。假手术组咬除T13L1棘突及全部椎板,暴露0.5 cm宽硬膜,不损伤脊髓;模型组和电针组采用改良Allens法建立急性脊髓损伤家兔模型,并行脊髓MRI扫描鉴定模型。模型组和假手术组不给予治疗,电针组给予电针刺激受损脊髓节段上下两对夹脊穴及上下督脉穴(筋缩、命门)治疗,每次30 min,每日1次,共7次。电针干预开始后1 d、3 d、7 d采用改良Tarlov评分法评价家兔后肢神经功能。干预结束后每组取10只家兔,以4%多聚甲醛行心脏灌注后剖取损伤脊髓约1 cm,制成切片后经HE染色于显微镜下观察脊髓组织形态,并采用免疫组织化学法观察脊髓细胞增殖情况和巢蛋白(Nestin)表达水平。将每组剩余的10只家兔麻醉,分离坐骨神经并注入5μL的30%辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),24 h后取脊髓横断面背侧靠近损伤处脊髓,采用HRP逆行示踪法标记红核神经元细胞数。结果:①模型鉴定结果。MRI片上假手术组脊髓横断面信号正常,可见清晰的脑脊液通过。模型组和电针组脊髓横断面信号增强,脑脊液受压;受伤节段的脊髓在矢状位MRI片T2WI上呈明显的高信号,T1WI上呈低信号;提示脊髓断端周围充血、水肿,证明造模成功。②后肢神经功能评分。电针干预后不同时间点Tarlov评分比较,差异有统计学意义,即存在时间效应(F=6.920,P=0.001);除假手术组外,干预后模型组和电针组Tarlov评分均逐渐升高。3组Tarlov评分总体上比较,组间差异有统计学意义,即存在分组效应(F=426.78,P=0.000)。干预开始后1 d,电针组Tarlov评分高于模型组[(0.30±0.47)分,(0.20±0.41)分,q=7.010,P=0.486],低于假手术组[(0.30±0.47)分,(4.70±0.47)分,q=30.843,P=0.000)];模型组低于假手术组(q=31.544,P=0.000)。干预开始后3 d,电针组Tarlov评分高于模型组[(1.55±0.60)分,(1.05±0.53)分,q=2.877,P=0.006],低于假手术组[(1.55±0.60)分,(4.80±0.41)分,q=20.775,P=0.000];模型组低于假手术组(q=23.651,P=0.000)。干预开始后7 d,电针组Tarlov评分高于模型组[(2.65±0.59)分,(1.40±0.50)分,q=8.004,P=0.000],低于假手术组[(2.65±0.59)分,(4.85±0.41)分,q=14.081,P=0.000];模型组低于假手术组(q=22.093,P=0.000)。时间因素和分组因素之间存在交互效应(F=70.786,P=0.000)。③脊髓组织形态。假手术组脊髓形态结构完整,神经元结构正常、分布均匀,细胞膜、细胞核及组织间隙均正常,尼氏体显示清晰;模型组脊髓组织正常结构丧失,可见组织充血、水肿,神经元细胞数量减少,部分尼氏体消失,灰质中部分区域甚至有较大的空腔;电针组与模型组相比,脊髓形态结构基本完整,神经元细胞结构基本正常,空泡变性减少,组织充血、水肿消失。④脊髓细胞增殖情况。电针干预开始后7 d,200倍显微镜下观察,每个视野下3组家兔脊髓增殖细胞数比较,组间差异有统计学意义[(43.67±8.19)个,(18.77±3.55)个,(6.30±2.32)个,F=382.413,P=0.000];电针组脊髓增殖细胞多于模型组(q=20.889,P=0.000)和假手术组(q=31.348,P=0.000),模型组多于假手术组(q=10.459,P=0.000)。⑤脊髓细胞Nestin表达水平。干预开始后7 d,200倍显微镜下观察,每个视野下3组家兔脊髓细胞Nestin阳性表达细胞数比较,组间差异有统计学意义[(23.37±5.10)个,(10.77±3.26)个,(4.43±1.33)个,F=218.084,P=0.000];电针组Nestin阳性表达细胞数多于模型组(q=15.770,P=0.000)和假手术组(q=23.696,P=0.000),模型组多于假手术组(q=7.926,P=0.000)。⑥红核神经元细胞数。干预开始后7 d,200倍显微镜下观察,每个视野下3组红核神经元细胞数比较,组间差异有统计学意义(513.40±46.79,417.90±43.03,578.40±43.91,F=32.760,P=0.000);电针组红核神经元细胞数多于模型组(q=6.771,P=0.000)、少于假手术组(q=4.608,P=0.000),模型组少于假手术组(q=11.379,P=0.000)。结论:电针刺激夹脊穴和督脉穴能明显改善急性脊髓损伤家兔的后肢神经功能,其作用机制可能是通过促进神经干细胞增殖分化和抑制红核神经元细胞凋亡,从而使损伤节段神经组织修复及神经通路再通。

• 出版日期2016
• 单位浙江省杭州市萧山区中医院; 浙江中医药大学; 浙江省肿瘤医院