犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立

作者：赵少若; 黄甜; 郝丽影; 吴洪超; 汪志艳; 崔宁宁; 王亚玲; 邓均华^*; 田克恭^*

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4429-4437.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.11.034

• 犬轮状病毒(CRV)
• 单克隆抗体
• 胶体金试纸条

【目的】研发犬轮状病毒(Canine ratavirus, CRV)免疫学诊断试剂，制备并鉴定CRV特异性单克隆抗体，建立可用于检测CRV的胶体金免疫层析法。【方法】以CRV临床分离株SL006株为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠，用杂交瘤细胞法进行细胞融合，通过间接免疫荧光法(IFA)筛选可稳定分泌CRV单克隆抗体的杂交瘤细胞，并制备腹水，亲和层析法进行纯化获得单克隆抗体。对获得的单克隆抗体进行鉴定，经条件优化建立胶体金试纸条检测方法，对试纸条的灵敏度、特异性、重复性和应用情况进行评价。【结果】获得了4株杂交瘤细胞，分别命名为2C12、4A5、1H3、5F3,IFA效价分别为1∶6 400、1∶12 800、1∶1 600和1∶3 200;重链亚类分别为IgG2b、IgG2a、IgG1和IgG2a,轻链亚类均为kappa;制备的胶体金试纸条检测线包被单克隆抗体4A5,对照线包被羊抗鼠IgG,金标垫包被胶体金标记的单克隆抗体2C12,对CRV病毒液的检测灵敏度为104.2 TCID50/mL,检测犬源其他病毒犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)、犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus, CPIV)、犬腺病毒Ⅰ型(Canine adenovirus-Ⅰ,CAV-Ⅰ)、CAV-Ⅱ、犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)病毒液及CRV阴性肛拭子和阴性粪便均为阴性；批内和批间重复性良好；利用制备的胶体金试纸条和RT-PCR方法对47份样品进行检测比较，两者符合率为93.6%。【结论】本研究建立的CRV胶体金试纸条检测方法具有良好的敏感性、特异性、重复性，与RT-PCR方法符合率较高，可为CRV的临床快速诊断提供有效的检测方法。

• 出版日期2022