单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定

作者：刘秀侠; 杨雄; 陈红英

来源：生物技术通报, 2013, (10): 177-183.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2013.10.014

• HIV-1
• gp41
• MPER
• 2F5
• 4E10
• 单链抗体 HIV-1 gp41 MPER 2F5 4E10 Single-chain antibody

为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测发现,2F5-scFv和4E10-scFv在两种表达菌中均以包涵体形式存在,重组蛋白分子量分别约为27 kD、29 kD。变性条件下,利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化,经复性后获得可溶性...

• 出版日期2013
• 单位西北农林科技大学