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摘要
目的对大鼠椎间盘包括上下软骨终板、纤维环及髓核组织进行整体培养,观察髓核组织的变化,探索椎间盘器官整体培养的实用技术。方法取健康清洁级5～6周龄SD大鼠60只,体重约150g,雌雄不限,完整取出腰段椎间盘器官共335个,用含肝素的高渗PBS液充分冲洗后置入含有渗透压为410mOsmol/kg高渗培养液的12孔培养板内,每天换液1次。于培养第0、3、7、14、21天行髓核细胞成活率检测(n=15)、免疫组织化学染色观察(n=2)、HE染色(n=15)、番红O染色观察(n=15),培养第0、3、7、14天行RT-PCR检测(n=5)。结果培养14d内髓核细胞成活率无明显变化(P>0.05),21d时显著低于其余各时间点(P<0.01)。各时间点免疫组织化学染色均显示髓核细胞内含大量Ⅱ型胶原。培养14d内HE染色和番红O染色示髓核和基质组织结构完整。图像分析显示,培养14d内各时间点间髓核组织灰度值比较差异均无统计学意义(P>0.05),21d与其余各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测显示,随着培养时间延长,Ⅰ型胶原mRNA表达呈上升趋势,而Ⅱ型胶原、核心蛋白聚糖和聚集蛋白聚糖均呈下降趋势;各基质蛋白mRNA表达的相对强度各时间点间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论利用高渗培养液可对椎间盘器官进行整体培养,为椎间盘生理与病理研究提供了一种理想模型。
