禽流感病毒H10N3亚型一步法双重RT-PCR检测方法的建立

作者：杨芷翊; 王新凯; 柳洋; 付思源; 张钰炘; 史玉婷; 曹琛福^*; 贾伟新^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(07): 811-815.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0136

• 禽流感病毒
• H10N3
• 双重RT-PCR
• 检测方法

2021年6月初，我国报道了全球首例H10N3亚型禽流感病毒感染人的事件，该亚型病毒具有跨宿主感染人类的能力，对社会公共卫生安全形成潜在的重大危害，因此，亟须建立一种快速、简便、适用于实验室的H10N3亚型禽流感病毒核酸检测方法。将自GISAID下载的H10N3亚型禽流感病毒HA基因和NA基因序列进行分析比对后，根据其保守区域设计并筛选出2对特异性检测引物，分别对引物浓度、核酸浓度、退火温度、循环数等进行优化，以确定最佳反应条件，建立禽流感病毒H10N3亚型一步法双重RT-PCR检测方法。结果显示，该方法可分别扩增出407 bp和602 bp禽流感病毒H10基因和N3基因的特异性条带，且不与H1N1、H3N2、H6N6、H7N9、H9N2亚型禽流感病毒以及NDV、IBV、IBDV、DTMUV发生交叉反应。该方法灵敏度高，最低检出限为900 pg。在对36份已知的临床样品的检测中，H10N3亚型禽流感病毒阳性率为2.78%，与禽流感H10Nx基因型、Hx N3基因型一步法RT-PCR检测方法以及病毒分离鉴定结果一致，符合率均为100%。上述结果表明，本研究建立的一步法双重RT-PCR方法可以在一次PCR反应中检出H10与N3亚型禽流感病毒混合感染或者单一感染样品，为兽医工作者开展H10N3、H10Nx和Hx N3亚型禽流感的临床诊断和流行病学监测提供了一种简单、有效的分子生物学快速检测方法。

• 出版日期2023
• 单位深圳海关动植物检验检疫技术中心; 华南农业大学; 人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室