猴免疫缺陷病毒抗体免疫梳检测方法的建立及应用

作者：李丹丹; 王绥家; 陈平亚; 张体银; 杨俊兴; 刘忠梅; 高慎阳

来源：中国实验动物学报, 2018, 26(02): 217-223.

DOI：10.3969/j.issn.1005-4847.2018.02.013

• 猴免疫缺陷病毒
• SIV30蛋白
• 免疫梳
• 快速检测方法
• 抗体

目的以基因工程技术制备猴免疫缺陷病毒(SIV)的SIV30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法(IC)用于特异性检测实验猴血清中抗SIV的抗体Ig G。方法应用原核表达载体p GEX-4T-1构建SIV SIV30基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测。结果最佳抗原包被量为0.02 mg/m L;制备好的IC均能够特异性检测到相应的SIV阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应,表明该检测方法特异性强;敏感性分析结果表明,SIV30蛋白能够敏感地检测到1∶400倍稀释的SIV阳性血清;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对10份可疑猴血清样品进行检测,IC与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa=1.000。结论原核表达了SIV30蛋白,制备了IC,并应用于临床检测。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。

• 出版日期2018-9-17
• 单位深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心; 锦州医科大学; 黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心; 海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心; 福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心