脑衰反应调节蛋白-2(CRMP-2)促进海马神经元轴突生长

作者：郑红云; 李艳; 童永清

来源：卒中与神经疾病, 2011, 18(03): 145-147+150.

• 脑衰反应调节蛋白2
• 海马神经元
• 原代培养
• 轴突
• 神经元极性

目的研究脑衰反应调节蛋白2(collapsin response mediator protein,CRMP-2)对原代海马神经元轴突生长的影响,探讨CRMP-2在神经元轴突生成中的作用。方法每次原代取孕18d SD大鼠1只,每只孕鼠含胎鼠约12~15只。显微镜下分离12~15只胎鼠双侧海马组织,消化法培养原代海马神经元。原代海马神经元培养采用核电转实验转染绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)和野生型CRMP-2(wild type(wt)CRMP2)和突变型T514D-CRMP2(突变体,模拟失活型CRMP-2)。培养72h固定做免疫荧光双标,分别绿色荧光蛋白(EGFP)和轴突标志物Tau-1,采用激光共聚焦显微镜和普通光学显微镜观察海马神经元形态变化。结果转染EGFP载体的对照组神经元正常发育,培养至72h,神经元轴突特异性表达标志物蛋白Tau-1;过表达了wtCRMP-2的神经元除了生成一条长的特异性表达Tau-1的轴突,另外一条突起也发育成了特异性表达Tau-1的轴突;而过表达了失活型CRMP-2的神经元发育与正常组相比无差异。结论野生型CRMP-2可明显促进轴突生长,而转染模拟磷酸化CRMP-2的突变体T514D-CRMP2则没有显示任何的促进作用。

• 出版日期2011
• 单位武汉大学人民医院