杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测

作者：柴丹丹; 李庆华; 阎赟梦; 毛丽红; 李靓; 朱立强; 薛乐勋

来源：郑州大学学报(医学版), 2012, (01): 16-20.

• S腺苷高半胱氨酸水解酶
• 酵母双杂交
• 诱饵载体
• 自激活
• 杜氏盐藻 S-adenosyhomocystine hydrolase
• yeast two-hybrid
• bait vector
• self-activation
• Dunaliella salina

目的:构建杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SAHH,并检测其对酵母细胞的毒性和自激活作用。方法:应用RT-PCR扩增杜氏盐藻的SAHHcDNA,测序分析后与酵母双杂交诱饵载体pGBKT7连接,构建诱饵载体pGBKT7-SAHH。用PEG/LiAc法将诱饵载体转入AH109和Y187酵母中,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无毒性和自激活作用。结果:成功构建了诱饵载体pGBKT7-SAHH并成功转化到酵母细胞AH109和Y187中,表达的融合蛋白对宿主酵母细胞无毒性。在AH109和Y187酵母细胞中诱饵载体均未激活报告基因HIS3和ADE2,但是激活了报...

• 出版日期2012
• 单位郑州大学第二附属医院