康氏木霉纤维素酶CBHI基因克隆及在大肠杆菌中的表达

作者：黄时海; 康超; 黄飞; 曹喜秀; 何鑫平; 汪晟; 吴孔阳; 曹普美; 梁智群; 李湘萍

来源：中国酿造, 2011, (02): 76-80.

• 康氏木霉
• 纤维二糖水解酶I
• cbhI基因
• 克隆表达 Trichoderma koningii
• cellobiohydrolase I
• gene cbhI
• cloning and expression

将康氏木霉(Trichoderma koningii)总RNA反转录成cDNA第一链,并以之为模板进行RT-PCR,合成约1.5kb的纤维二糖水解酶Ⅰ(cbh I)基因。cbhI基因经测序确认后克隆到表达载体pET-30a(+)上,PCR和双酶切鉴定筛选阳性重组子;将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,并用0.4mmol/L的IPTG诱导表达重组蛋白。实验结果:cbh I基因在BL21(DE3)plysS中胞内融合表达,重组蛋白pNPC酶活为15.6U/L,最适反应温度为45℃,最适pH值为5.0,Mn2+对酶活力有明显的促进作用,SDS-PAGE表明重组蛋白分子量约为70kDa...

• 出版日期2011
• 单位南宁新技术创业者中心; 广西大学