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摘要
目的 探讨叶酸对糖尿病小鼠视网膜的保护作用及其抗氧化和抗炎机制。方法 采用随机数字表法将32只16周龄SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组和叶酸组,另选择16周龄SPF级雄性C57BL/KsJ小鼠16只作为对照,叶酸组小鼠用(2 ml)叶酸灌胃每日1次,剂量为71 μg/kg,连续60 d；对照组和模型组小鼠以相同的方法给予相同体积的生理盐水,定期观察并记录各组小鼠运动、精神状态、体质量、空腹血糖(FPG)水平变化。灌胃结束后摘取小鼠眼球并分离视网膜；采用苏木精－伊红染色法评估各组小鼠视网膜组织病理学变化；收集小鼠球后血标本,采用ELISA法测定小鼠血清中同型半胱氨酸(Hcy)水平；采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠视网膜中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平；采用Western blot法检测小鼠视网膜中B淋巴细胞瘤2蛋白(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、3-硝基酪氨酸(3-NT)和4-羟基壬氨酸(4-HNE)水平变化；采用生化试剂盒检测小鼠视网膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和丙二醛(MDA)含量；采用免疫荧光染色法测定视网膜中NADPH氧化酶4(NOX4)含量。结果 实验期间对照组小鼠FPG正常,体质量缓慢平稳增加；模型组小鼠FPG>16.7 mmol/L,体质量快速增加,叶酸组小鼠FPG逐渐下降,体质量增加较模型组平缓。实验后2个月,模型组小鼠血清Hcy浓度为(27.18±3.18)μmol/L,高于对照组的(8.28±2.18)μmol/L和叶酸组的(13.73±2.54)μmol/L,差异均有统计学意义(均P<0.05)；对照组小鼠视网膜结构完整,模型组小鼠视网膜厚度变薄,毛细血管生成增加,可见炎症细胞浸润,叶酸组小鼠视网膜厚度较模型组增加,新生血管和炎症细胞减少。模型组视网膜中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达量均高于对照组,叶酸组视网膜组织中TNF-α mRNA、IL-6 mRNA相对表达量低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。叶酸组小鼠视网膜中bax、3-NT和4-HNE蛋白相对表达量均高于对照组,但低于模型组,bcl-2蛋白相对表达量均低于对照组而高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)；叶酸组小鼠视网膜中T-SOD活性高于对照组而低于模型组,视网膜中8-OHdG质量浓度和MDA含量均低于对照组而高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)；叶酸组小鼠视网膜组织中NOX4蛋白表达明显弱于模型组。结论 叶酸对糖尿病小鼠视网膜组织具有保护作用,其作用机制与降低血清Hcy水平、抑制视网膜组织中氧化应激反应细胞凋亡有关。
