高GC hTwist融合蛋白载体构建及其表达条件优化

作者：王利利; 刘彩红; 朱亚勤

来源：中国医科大学学报, 2012, (03): 204-207.

• 高GC hTwist
• 克隆
• 融合蛋白
• 原核表达 GC-rich hTwist
• cloning
• recombinant protein
• prokaryotic expression

目的构建高GC基因Twist融合蛋白表达载体;高效表达并纯化GST/TWIST融合蛋白,为GST-Pulldown等实验做准备。从而进一步研究其生物学功能。方法以胃癌细胞系SGM7901 cDNA为模板,依据高GC含量基因Twist分子结构特点和高GC含量基因引物设计策略,合成PCR引物。本实验通过分析各种DNA聚合酶不同扩增效率及特异性,选择适合高GC基因扩增的DNA聚合酶,优化反应体系的离子强度,并且结合改良降落PCR等综合策略的实施,比较不同策略下高GC含量基因Twist PCR产物的特异性及效率,尝试高效扩增特异的高GC含量Twist全长编码基因,通过Bam HI和Xho I双酶切位点...

• 出版日期2012
• 单位中国医科大学