抗人转化生长因子β1纳米抗体的制备及功能鉴定

作者：王玥; 李峥; 陈慧; 张建民; 何维

来源：基础医学与临床, 2020, 40(5): 632-638.

DOI：10.3969/j.issn.1001-6325.2020.05.009

• 人转化生长因子β1
• 纳米抗体
• 噬菌体展示文库

目的 制备并鉴定羊驼来源的高特异性、高亲和力的抗人转化生长因子β1(TGF-β1)的纳米抗体.方法 构建真核表达质粒并瞬时转染人胚胎肾上皮细胞HEK-293T,获得重组TGF-β1蛋白;用该蛋白混合弗氏佐剂免疫羊驼,分离外周血单核细胞,提取RNA进行巢式PCR,扩增抗体重链可变区(VHH),并构建VHH噬菌体展示文库;利用ELISA筛选能与TGF-β1重组蛋白特异性结合的抗体株,原核表达并纯化抗TGF-β1的纳米抗体;利用免疫印迹、免疫荧光和ForteBio Octer? 等方法鉴定纳米抗体的特异性及亲和力.结果 成功构建cFUGW-TGF-β1表达载体并纯化了3 mg TGF-β1蛋白;羊驼经过5次免疫后得到容量为1.2×108的TGF-β1-VHH噬菌体展示文库;通过4轮ELISA筛选,得到7株能与重组TGF-β1蛋白特异性结合的抗体株;免疫印迹及免疫荧光实验结果均显示原核表达纯化的TGF-β1纳米抗体B3和C8能特异性识别肺癌细胞系NCI-H520表达的天然TGF-β1;ForteBio Octer? 结果显示B3、C8与重组TGF-β1的亲和力分别达到1.48×10-9 mol/L、9×10-9 mol/L.结论 TGF-β1纳米抗体B3和C8能特异性结合TGF-β1,特异性强、亲和力高,或可开发用于肿瘤的免疫治疗.

• 出版日期2020
• 单位中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院