A型肉毒神经毒素轻链人源性抗体的筛选、表达与检测

作者：赵鹏; 胡颖; 安佳佳; 韦娜; 熊向华; 汪建华; 张惟材; 徐威

来源：军事医学, 2016, (05): 396-400.

• A型肉毒神经毒素
• 噬菌体抗体库
• 抗体
• 单克隆 botulinum neurotoxin serotype A
• phage antibody library
• monoclonal antibody

目的从全合成人源性噬菌体单链抗体库中筛选抗A型肉毒神经毒素轻链(Bo NT/A LC)特异性单抗,并进行全抗的表达、纯化与鉴定。方法根据大肠杆菌密码子偏好性优化并合成Bo NT/A LC序列,克隆至p TIG质粒,转化BL21(DE3)plys S感受态细胞,IPTG诱导表达后Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白。利用纯化的轻链蛋白从噬菌体抗体库中经"吸附-洗脱-扩增"程序淘选富集抗体并进行特异性筛选。PCR扩增抗体轻重链可变区分别连入L293-CL和H293载体,瞬时共转染293-F细胞,培养上清经Protein A柱纯化,通过SDS-PAGE、Western印迹和ELISA检测抗体纯度和特异性...

• 出版日期2016
• 单位中国人民解放军军事医学科学院; 沈阳药科大学