Psalmotoxin-1抑制活化的肝星状细胞过程中microRNA差异表达谱的变化分析

摘要

目的:探讨酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a)特异性阻断剂狼蛛毒素(psalmotoxin-1,PcTx-1抑制血小板衍生生长因子BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)过程中微小RNA(microRNA,miRNA)差异表达谱及生物信息学分析。方法:取对数生长期的HSC细胞,分为对照组、模型组和PcTx组。对照组不做处理,模型组加入PDGF-BB(10 ng/mL)培养24 h,PcTx组给予PcTx-1刺激1 h后,再加入PDGF-BB(10 ng/mL)培养24 h。采用RT-PCR和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen-Ⅰ)和ASIC1a的表达,MTT法检测细胞增殖情况,验证HSC细胞是否活化以及PcTx-1是否阻断ASIC1a的表达。提取的总RNA质检合格后进行高通量测序,筛选差异表达的miRNA。通过miRanda算法对差异miRNA进行靶基因预测,并对miRNA靶基因进行功能和代谢通路分析。结果:PcTx-1阻断ASIC1a后,ASIC1a的表达降低,HSC细胞活化的标志性基因α-SMA和collagen-Ⅰ的表达明显减少,提示PcTx-1可阻断PDGF诱导的HSC活化。与对照组比较,模型组miRNA表达谱中差异表达miRNA共有38个,其中上调6个,下调32个(P <0.05)。与模型组比较,PcTx组miRNA表达谱中差异表达miRNA共有17个,其中上调1个,下调16个(P <0.05)。结论:高通量筛选得到的PcTx-1抑制PDGF-BB活化HSC过程中miRNA差异表达谱,为肝纤维化的发病机制研究提供了新的靶点和思路。

关键词