黏类小麦细胞质雄性不育系mtDNA消减文库的构建

作者：胡俊敏; 张龙雨; 袁正杰; 张改生; 韩艳芬; 李亚鑫; 盛英; 位芳; 王俊生; 牛娜; 马守才; 李红霞

来源：分子植物育种, 2010, (02): 370-374.

• 黏类小麦
• 雄性不育系
• 线粒体DNA
• 抑制性消减杂交 Wheat with Aegilops kotschyi
• Cytoplasmic male sterile lines
• Mitochondrial DNA (mtDNA)
• Suppression subtractive hybridization (SSH)

本研究利用抑制性消减杂交技术,构建了黏类小麦细胞质雄性不育线粒体DNA的消减文库。分别提取相同细胞质背景下的不育和可育等基因系线粒体基因组DNA(mtDNA),用RsaⅠ酶切成大小不等的片段,并各自与不同的接头连接,连续经过两次消减杂交和两次PCR扩增,将PCR产物与克隆载体连接,转化为大肠杆菌感受态细胞DH5α,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建差异DNA消减文库。在构建的不育mtDNA文库中,将SSH文库的全部扩增产物与SSH文库中的单条扩增条带分别进行胶回收和克隆转化,分别挑取54个和6个阳性克隆进行测序分析和相关功能初步比对。结果表明,不育mtDNA的SSH...

• 出版日期2010
• 单位西北农林科技大学