清感冬饮通过调控NF-κB/iNOS/NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

作者：苏瑞; 卢佳; 席智男; 王佳宝; 宋新波; 张晗; 苗琳^*

来源：天津中医药大学学报, 2022, 41(06): 737-745.

• 清感冬饮
• RAW264.7巨噬细胞
• 脂多糖
• 抗炎
• NF-κB/iNOS/NO信号通路

[目的]通过构建脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型，探讨清感冬饮（QGDY）的抗炎作用及其机制。[方法]采用CCK-8法和LDH法检测不同浓度的清感冬饮对HEK293T细胞和RAW264.7巨噬细胞的细胞活力及LDH漏出量的影响。分别建立抗氧化反应元件（ARE）和核因子-κB(NF-κB)双荧光素酶报告系统，考察清感冬饮对HEK293T细胞ARE、NF-κB表达情况的影响。建立LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞体外炎症模型，将RAW264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、LPS模型组、清感冬饮低、中、高剂量组（1、10、100μg/mL），倒置显微镜下观察各组细胞的形态差异；采用Griess法和ELISA法测定各组细胞上清中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量；采用qRT-PCR法检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平；利用免疫荧光法观察核因子-κB p65(p65)核移位情况；采用Western blot法检测各组细胞一氧化氮合酶（iNOS）和p65蛋白表达情况。[结果] 0.01～10μg/mL清感冬饮对HEK293T细胞活力无显著影响，1～10μg/mL清感冬饮明显抑制TNF-α诱导的NF-κB启动子的活性，清感冬饮对ARE启动子的活性无显著影响。初步证明清感冬饮具有抗炎作用，而无明显抗氧化作用。0.01～100μg/mL清感冬饮干预24 h对RAW264.7巨噬细胞无细胞毒性作用。与模型组相比，1～100μg/mL清感冬饮显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中NO及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放；10～100μg/mL清感冬饮显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平，抑制p65核移位；100μg/mL清感冬饮显著抑制总蛋白iNOS、核蛋白p65表达，显著促进浆蛋白p65表达。[结论]清感冬饮可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症反应，该抗炎作用可能与调控NF-κB/iNOS/NO信号通路、抑制促炎因子释放有关。

• 出版日期2022
• 单位天津中医药大学