AGEs在肾移植术后动脉粥样硬化形成中的作用及其机制研究

作者：刘超^*

来源：硕士, 南京医科大学, 2013.

• 肾移植术后
• 动脉粥样硬化
• 晚期糖基化终末产物
• 血管平滑肌细胞
• 成骨细胞
• 转分化

目的：探讨晚期糖基化终末产物（Advanced Glycosylation End products，AGEs）参与肾移植术后动脉粥样硬化形成的作用及相关机制。方法：以AGEs的ELISA试剂盒检测正常人和肾移植受者血清AGEs浓度；应用全自动生化分析仪测定两组人群的生化指标；实时二维B超图像检测颈动脉内中膜厚度（interima-media thickness，IMT）及动脉粥样斑块的有无；同时，部分肾移植受者于动静脉内瘘术中取一小段桡动脉，并以产妇脐带动脉为正常对照，以免疫组织化学法检测两组人群动脉壁中骨桥蛋白（osteopontin，OPN）的表达及分布。分离培养SD大鼠原代主动脉血管平滑肌细胞（Vascular SmoothMuscle Cells，VSMCs），体外制备并鉴定AGEs；用AGEs200mg/L作用该细胞不同时间（12h~12d），采用免疫蛋白印迹法和间接免疫荧光染色法检测平滑肌肌动蛋白-α (alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、成骨细胞特异性核转录因子（runt-related transcription factor2, RUNX2）和OPN的表达和分布变化；以甲-酚酞络合酮方法检测细胞钙盐的沉积。同时，以等量牛血清白蛋白（BovineSerum Albumin，BSA）处理组为正常对照。结果:15名正常人血清AGEs浓度为13.77±4.75mg/L，而50名肾移植受者血清AGEs浓度检34.61±18.42mg/L，较正常人明显升高（P<0.01）；两组人群除高血压人数比例外，年龄、性别、血肌酐等指标结果均无差异（P>0.05）；50名肾移植受者IMT为0.81±0.19mm，动脉粥样斑块阳性率为31.32%，两组数据均高于15名正常人（P<0.05）。第2~5代VSMCs呈梭形，两代细胞中α-SMA均高度表达，两代细胞在形态及α-SMA表达上无显著差异；接下来，以第五代VSMCs为研究对象，分别给予AGEs或BSA作用不同时间后，以免疫蛋白印迹法分析结果表明，与BSA处理组相比，AGEs处理组细胞中α-SMA表达量及阳性细胞数进行性减少（P<0.05）；同时，AGEs处理组细胞中成骨细胞特异性标志蛋白RUNX2及OPN表达均进行性升高（P<0.05）。此外，与BSA处理组比较，AGEs作用后VSMCs中钙沉积含量明显增加（P<0.05）。结论:肾移植受者血清中AGEs浓度高于正常人，且其浓度升高与肾移植受者动脉粥样硬化形成密切相关；进一步研究证实AGEs可能通过诱导VSMCs中RUNX2表达增加，使成骨样细胞标志性蛋白OPN表达及细胞内钙离子沉积增加，进而促发VSMCs发生向成骨样细胞表型转分化，从而促进肾移植术后动脉粥样硬化的发生及进展。

• 出版日期2013
• 单位南京医科大学