脐带间充质干细胞外泌体携载miR-4465抑制食管癌细胞的侵袭及迁移

作者：孙峰; 谢玮^*

来源：医学研究生学报, 2021, 34(12): 1252-1258.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2021.12.004

• 人脐带间充质干细胞
• 外泌体
• 食管癌细胞
• miR-4465
• 迁移
• 侵袭

目的 间质干细胞分泌的外泌体(MSC-ex)是MSC旁分泌的活性成分，在多种疾病包括肿瘤的治疗中有着重要的应用。文章拟探讨人脐带间充质干细胞(MSC)外泌体携载miR-4465抑制食管癌细胞EC109侵袭、迁移的作用及机制。方法 分离、培养脐带MSCs并提取MSC-ex,透射电镜、纳米颗粒分析观察外泌体的结构，Western blot检测外泌体标志蛋白CD9和CD81表达。超声法将miRNA mimics NC及miR-4465 mimics导入MSC-ex,获得miRNA mimics NC修饰MSC-ex(NC miR-ex)及miR-4465 mimics修饰MSC-ex(miR-4465-ex)。PBS、MSC-ex、miR-4465-ex分别与EC109共培养，采用激光共聚焦显微镜观察MSC-ex在细胞内分布，qRT-PCR检测EC109的miR-4465水平，Transwell和划痕实验观察miR-4465 mimics转染及miR-4465-ex作用后EC109的迁移及侵袭能力，免疫印迹法检测EC109的上皮-间质化相关蛋白的表达。结果 与NC miR-ex组(1.00±0.09)比较，miR-4465-ex 25 nmol/L、miR-4465-ex50nmol/L组EC109细胞中miR-4465表达水平(20.26±2.75、34.71±5.26)显著升高(P<0.01),且具有剂量依赖性。与mimics NC组(84.67±4.60)相比，miR-4465 mimics25 nmol/L(23.67±4.14)转染组EC109细胞的迁移率明显降低(P<0.01),且miR-4465 mimics50nM(10.27±1.32)转染组EC109细胞的迁移率更加明显(P<0.01)。与NC miR-ex组(82.35±4.52)比较，miR-4465-ex组(23.12±2.22)EC109细胞的迁移率明显降低(P<0.01),Western blot结果表明，与PBS和NC miR-ex组相比，miR-4465-ex作用后EC109细胞N-Cadherin(P<0.05)、p-Smad1/2(P<0.01)和Vimentin(P<0.01)表达下调，E-Cadherin表达上调(P<0.01)。结论 MSC-ex作为载体携载高水平miR-4465,可能通过下调TGFβ/Smad1/2通路抑制食管癌细胞EC109的侵袭、迁移。

• 出版日期2021
• 单位南通大学; 南通市第一人民医院; 南通市肿瘤医院