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摘要
[目的]本研究主要通过对吕氏泰勒虫潜在抗原蛋白PIP的抗原性生物信息学分析和原核表达,为下一步研究诊断候选抗原奠定基础。[方法]根据Gen Bank上的吕氏泰勒虫潜在抗原蛋白PIP (potential immunogenic protein)序列,利用DNAstar软件对其核苷酸序列、编码蛋白的氨基酸序列、抗原表位及信号肽进行分析,预测其B抗原表位和T抗原表位。对吕氏泰勒虫PIP基因主要抗原片段区序列设计特异性引物,用RT-PCR方法扩增出目的片段,构建表达载体,诱导表达并纯化PIP。[结果]生物信息学分析结果表明PIP基因全长1213bp,蛋白质编码区大小为516bp,具有1个外显子。氨基酸序列分析显示1～17位氨基酸为信号肽序列,41-48位,68-75位,110-116位,122-129位,147-149位及151-158位氨基酸可能为B细胞抗原表位,而T细胞抗原表位可能有8个。以吕氏泰勒虫DNA为模板成功的克隆出主要抗原片段区序列。并构建重组表达载体pTYB12-PIP,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出融和蛋白CBP-PIP。[结论]本试验成功克隆PIP蛋白主要抗原片段,抗原表位分析发现该蛋白具有一定的抗原性,可作为研究吕氏泰勒虫诊断用候选抗原。
- 出版日期2019
- 单位海南大学
