可变剪接体WNT4-β对山羊卵泡颗粒细胞增殖和激素分泌的影响

作者：王鹏; 韩海银; 李文韬; 刘子嶷; 储明星^*; 刘玉芳^*

来源：畜牧兽医学报, 2022, 53(10): 3480-3489.

• 山羊
• 卵泡发育
• 颗粒细胞增殖
• 可变剪接体
• WNT4-β

旨在研究WNT4的一个可变剪接体(WNT4-β)对山羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取4～6月龄健康母羊20只，采集双侧卵巢，体外分离卵泡颗粒细胞进行培养。通过免疫荧光染色技术确定WNT4-β的表达位置；在山羊颗粒细胞中过表达或干扰WNT4-β后，利用RT-qPCR、Western blot检测WNT4-β和WNT信号通路中关键标记因子ROA1、RHOA及颗粒细胞增殖标记基因cyclin-D2、CDK4的表达变化；CCK-8技术检测颗粒细胞增殖情况；并通过ELISA分析颗粒细胞中生殖激素水平的变化。免疫荧光染色结果显示，WNT4-β只在山羊卵泡颗粒细胞中表达，在卵母细胞不表达；过表达WNT4-β后，WNT4-β和颗粒细胞增殖因子cyclin-D2、CDK4的mRNA相对表达量极显著增加(P<0.01),蛋白表达水平显著增加(P<0.05);WNT信号通路标记因子ROA1、RHOA mRNA表达水平显著增加(P<0.05),β-catenin蛋白表达水平显著增加(P<0.05);干扰WNT4-β后，WNT4-β、cyclin-D2、CDK4、ROA1和RHOA的mRNA表达显著降低(P<0.05),WNT4-β、cyclin-D2、CDK4及β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。CCK-8结果显示，过表达WNT4-β促进颗粒细胞增殖(P<0.05);ELISA结果显示，过表达WNT4-β后，颗粒细胞中雌二醇(estradiol, E2)水平显著增加(P<0.05),孕酮(progesterone, P4)水平升高但不显著(P>0.05);干扰WNT4-β后则结果相反，颗粒细胞增殖受到抑制(P<0.05),E2和P4的水平显著降低(P<0.05)。综上所述，WNT4可变剪接体WNT4-β通过调控WNT信号通路促进山羊卵泡颗粒细胞增殖及类固醇激素分泌，本研究为解析WNT4调控山羊颗粒细胞增殖的潜在分子机制提供理论基础。

• 出版日期2022
• 单位河北工程大学; 生命科学与食品工程学院; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所