MAP30全长基因的克隆及在巴斯德毕赤酵母中的高效表达研究

作者：朱振洪; 杨威威; 葛立军; 万海同

来源：中国医药生物技术, 2010, 5(02): 110-116.

DOI：10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.02.006

• 苦瓜
• 核糖体蛋白质类
• 毕赤酵母
• 基因表达 Momordica charantia
• Ribosomal proteins
• Pichia
• Gene expression

目的研究毕赤酵母中高效表达全长MAP30蛋白及其生物活性。方法根据GeneBank公布的MAP30全序列设计特异性引物,以苦瓜基因组为模板,PCR扩增MAP30全长基因,将该基因插入pPIC9k载体中,经SacI酶切线性化后,电转化至GS115细胞,再通过G418筛选,最终获得了高拷贝重组GS115菌株。重组菌株在甲醇诱导下,SDS-PAGE分析表达的特异性条带,运用Pharmacia VDS图像分析软件进行条带密度扫描,得到各条带的扫描曲线图,计算出同一泳道目的蛋白条带峰面积相对于整个曲线所占的百分比,即蛋白纯度,并根据蛋白纯度和上清蛋白总量(Lowry法)计算出发酵上清液中目标蛋白含量。纯...

• 出版日期2010
• 单位生物工程学院; 浙江中医药大学