拟南芥多聚ADP核糖聚合酶Ⅰ的原核表达与活性检测

作者：张海磊; 吴巧; 葛晓春

来源：西北植物学报, 2014, (05): 866-872.

• 拟南芥
• 翻译后修饰
• 多聚ADP核糖聚合酶
• 原核表达 Arabidopsis
• posttranslational modification
• poly(ADP-ribose)polymerase
• prokaryotic expression

采用RT-PCR技术获得了拟南芥多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]PARP1基因的全长cDNA,转入原核表达载体pET32a并转化宿主菌Origami(DE3),加入终浓度为0.3mmol/L IPTG,在16℃下诱导可获得较多的可溶重组蛋白。纯化TRX-PARP1,在反应液中加入NAD+和断裂DNA,通过SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting分析,TRX-PARP1分子量可随着时间的延长逐渐增大,产生向上的弥散,表明蛋白质连上了ADP核糖分子;与此对比,作为参照的标签蛋白TRX无此现象。实验结果显示原核表达拟南芥PARP...

• 出版日期2014
• 单位复旦大学