绵羊c-Myc与EGFP融合蛋白的真核表达及其对细胞增殖的调控作用

作者：韩高链; 郭丽荣; 李孟心; 郑腾飞; 李俊玲; 秦健; 杜荣^*

来源：畜牧兽医学报, 2020, 51(05): 965-975.

• 绵羊
• c-Myc基因
• EGFP
• 真核表达
• 生物信息学
• 细胞周期相关基因
• 调控元件

为了探讨c-Myc基因对细胞增殖及相关基因表达的调控作用,本试验构建了c-Myc-(G4S)3-EGFP融合基因的真核表达载体pc-Myc-EGFP,并利用生物信息学分析了其结构和理化特征。转染后分别通过细胞计数和qRT-PCR检测了其对绵羊胚胎成纤维细胞(sheep embryonic fibroblasts, SEF)增殖及相关基因表达的影响,并利用启动子分析软件解析了相应的表达调控机制。酶切鉴定和测序结果表明,载体构建成功。生物信息学分析表明,绵羊c-Myc蛋白主要定位于细胞核,含有螺旋环螺旋(helix-loop-helix, HLH)结构域,其分子量为48 474.78 u。融合蛋白c-Myc-(G4S)3-EGFP有较强的亲水性,且含有31个磷酸化位点。因(G4S)3有较高的灵活度(9.848 5),两侧的c-Myc和EGFP都保持各自的空间构象且互不干扰。进一步的细胞试验结果表明,重组质粒pc-Myc-EGFP在SEF中能够表达。过表达c-Myc促进了SEF的增殖,使cyclin D2、Cdk4、Cdk6、cyclin E1、cyclin A2、cdc25A mRNA的表达水平分别升高至5.20、3.10、6.54、6.52、23.37和8.22倍(P<0.01),E2F1 mRNA的表达升高至1.83倍(P<0.05)。启动子分析结果表明,各基因的5′调控区存在c-Myc和E2F1的结合元件。综上所述,绵羊c-Myc通过上调细胞周期相关基因的表达促进SEF细胞增殖,c-Myc的作用机制可能是通过直接作用于靶基因5′调控区的E-box元件,也可能是通过其他转录因子(如E2F1)的间接调控作用而实现。

• 出版日期2020
• 单位动物科技学院; 生命科学学院; 山西农业大学