脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白结合肽序列的亲和筛选

作者：曹虹; 林琳; 刘北一; 陈丽丹; 杨军; 贡树基; 李明

来源：微生物学通报, 2006, 33(05): 101-106.

DOI：10.3969/j.issn.0253-2654.2006.05.021

• 噬菌体展示肽库
• 脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白
• 结合肽
• 亲和筛选

应用噬菌体展示肽库技术,以重组的脑膜炎大肠杆菌致病蛋白IbeA作为靶分子,经过吸附-洗脱-扩增-再吸附的亲和筛选,随机挑选亲和力强的噬菌体克隆,进行ELISA、竞争抑制实验和序列测定。结果显示,经3轮淘选后,间接ELISA鉴定得到高亲和性结合IbeA蛋白的15个阳性克隆。竞争抑制实验结果表明,游离IbeA蛋白能竞争抑制噬菌体结合肽克隆与固相包被的IbeA蛋白的结合,其抑制作用随游离IbeA蛋白浓度的降低而减弱。测序结果得到5种阳性噬菌体克隆展示肽序列。上述结果提示以脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白为靶筛选所获得的噬菌体12肽克隆,具有特异性,其结合肽序列呈现相对保守性。建立的从噬菌体随机肽库筛选IbeA蛋白结合肽的方法具有方便、灵活和高效可行的特点。

• 出版日期2006
• 单位南方医科大学; 基础医学院