下调血管生成素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响

作者：舒静; 田文琳; 李林; 刘玉林; 陈俊霞

来源：第三军医大学学报, 2014, 36(14): 1460-1466.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2014.14.012

• 血管生成素
• 膀胱癌
• 增殖
• 凋亡

目的构建人血管生成素(angiogenin,ANG)基因siRNA干扰质粒,检测其对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响。方法将针对人ANG基因siRNA表达质粒和无同源性的对照质粒稳定转染T24细胞后经G418筛选出阳性克隆。根据转染质粒不同分为3组:T24组(未转染组)、T24-NC组(转染阴性对照质粒组)、T24-siANG组(转染干扰质粒组)。通过RT-PCR检测T24细胞中ANG的mRNA表达水平,Western blot检测ANG蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术、TUNEL及Hochest 33342检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达;构建BALB/c裸鼠[4~6周龄,体质量(20±3)g]移植瘤模型,组织HE染色和免疫荧光CD31检测微血管变化;组织免疫化学方法检测移植瘤中ANG、Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达。结果酶切和测序结果证明重组质粒构建成功;T24-siANG组ANG的mRNA水平及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);T24-siANG组细胞增殖活力明显下降(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示:与T24-NC组和T24细胞组相比,T24-siANG组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01);TUNEL检测结果显示:T24-siANG组出现大量凋亡细胞;Hochest检测结果显示:T24-siANG组出现典型的凋亡形态特征如染色质凝集、核碎裂和明亮的蓝色荧光等;Western blot结果显示,在T24-siANG组中,Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),而Bax和激活的Caspase-3的表达明显升高(P<0.05);组织HE染色和组织免疫荧光显示:T24-siANG组肿瘤微血管生成较T24与T24-NC组明显减少(P<0.01);组织免疫化学结果也表明:T24-siANG组ANG、Bcl-2蛋白显著降低,而Bax、活化的Caspase-3蛋白明显升高。结论成功构建的干扰质粒通过降低ANG的表达、抑制膀胱癌T24细胞的增殖、调节凋亡关键蛋白的表达,从而促进膀胱癌T24细胞的凋亡。

• 出版日期2014
• 单位重庆医科大学; 基础医学院