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摘要
旨在构建肌细胞增强因子MEF2A(myocyte enhancer factor 2A)基因的重组干扰载体，探究MEF2A基因对牛成肌细胞的影响。本研究选择3头健康的3日龄雌性关岭牛，体重约为21 kg,采集背最长肌组织成功培养成肌细胞。设计MEF2A基因的4对shRNA干扰序列和1对NC阴性对照序列，将其连接至pGPU6-GFP-Neo载体上，转染重组载体至关岭牛成肌细胞。采用qRT-PCR法筛选干扰效率最佳的载体，并检测干扰MEF2A基因对肌生成因子MEF2B、MEF2C、MEF2D,周期与凋亡因子CDK2、CCNA2、BCL2 mRNA表达水平的影响；随后利用流式细胞仪与酶标仪探究干扰载体对成肌细胞增殖生长的影响，各试验组别设置3个生物学重复。同时运用在线软件预测牛MEF2A蛋白理化性质与网络谱图。结果显示，本研究成功筛选出干扰效率最佳的shRNA-MEF2A-3载体(P<0.01)。MEF2A基因被抑制后，成肌细胞中MEF2B、MEF2C与MEF2D基因表达量均极显著上调(P<0.01);CDK2与BCL2表达量皆显著下调(P<0.05),CCNA2表达量极显著下调(P<0.01);与对照组相比，干扰组细胞周期明显延长，干扰组成肌细胞在6 h后的增殖活性均极显著低于对照组(P<0.01)。由此可初步推测，MEF2A干扰载体成功转染至牛成肌细胞后，可有效抑制MEF2A基因表达，改变基因表达模式，影响了关岭牛成肌细胞的分裂增殖，为进一步探究MEF2A基因对关岭牛肉质性状调控机制和挖掘地方种质资源提供数据支撑。
- 出版日期2023
- 单位贵州大学; 动物科学学院
