hAPOB的克隆、原核表达及抗体效价分析

作者：徐志伟; 王期; 徐一然; 陈永霞; 徐小波; 于建宁^*

来源：西南农业学报, 2019, 32(02): 446-450.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2019.2.036

• hAPOB
• pGEX-4T-1
• 抗血清
• 抗体效价
• 湖羊

【目的】人载脂蛋白B(hAPOB)是保持人体血脂恒定的重要蛋白,检测hAPOB具有重要的临床价值。【方法】本研究将hAPOB(97-526AA)序列连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1-hAPOB(97-526AA)原核表达质粒,然后将其转入宿主菌BL21,宿主菌表达出与预期分子量大小相符的80 kDa的融合蛋白;将纯化后的融合蛋白免疫湖羊,制备抗hAPOB血清并检测抗体效价。【结果】每次注射0.4 mg的原核表达抗原,湖羊抗血清的产生效果最佳;经间接酶联免疫分析(ID-ELISA)方法检测,原核表达蛋白免疫湖羊得到的hAPOB抗体效价为l︰40000。【结论】本试验获的抗血清能够满足商用标准,为后续拓展其应用奠定了基础。

• 出版日期2019
• 单位江苏丘陵地区镇江农业科学研究所; 南京师范大学; 江苏大学; 江苏省农业科学院; 生命科学学院