改良法体外分离培养炎症来源的人牙周膜干细胞

作者：刘焱; 陈青宇^*; 赵晓霞; 高翔; 高俊武; 王靖宇

来源：医学理论与实践, 2019, 32(23): 3764-3767.

DOI：10.19381/j.issn.1001-7585.2019.23.002

• 炎症
• 人牙周膜干细胞
• 改良法
• 体外培养

目的:采用改良的酶消化组织块盖玻片法结合有限稀释克隆法对炎症来源的人牙周膜干细胞(inflammatory human periodontal ligament stem cells,i-hPDLSCs)进行原代培养、分离纯化并鉴定其生物学特性。方法:从慢性牙周炎患者的牙周韧带中分离并培养i-hPDLSCs。通过免疫荧光染色检测角蛋白和波形丝蛋白的表达鉴定细胞来源;进行早期间充质干细胞标志物STRO-1表达的检测;通过MTT比色法评估细胞的增殖能力并计算克隆形成率;流式细胞术分析细胞周期。结果:通过改良培养方法获得的i-hPDLSCs呈长梭或多边形,贴壁生长。免疫荧光染色显示波形丝蛋白阳性表达,角蛋白阴性表达;STRO-1阳性表达。i-hPDLSCs具有较强的克隆形成能力。MTT结果显示:第1天时,OD值较小,增殖缓慢;细胞数量和活性在培养的第3～7天显著增加,第7天达到峰值,在第9天,细胞增殖进入平台期。细胞周期的分析结果提示:大多数细胞处于G0/G1期并且表现出缓慢的周期性特征。结论:改良的酶消化组织块盖玻片结合有限稀释克隆方法可以成功地从炎症来源的牙周韧带分离出具有较强克隆形成能力、较高增殖能力和成体干细胞样表型及生物学特征的i-hPDLSCs。

• 出版日期2019
• 单位包头医学院; 呼和浩特市第一医院