GST/HIF-1α融合蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

作者：佟宇鑫; 李丹妮; 邵阳光; 李妍; 李丰

来源：中国医科大学学报, 2009, 38(10): 721-723+729.

• 缺氧诱导因子1α 截短突变体
• 质粒
• 原核表达

目的构建GST/HIF-1α融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-HIF-1α为模板,用PCR法扩增HIF-1α全长及各个截短片段,通过BamHI和NotI酶切位点将HIF-1α全长及各个截短突变体定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST/HIF-1α全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了HIF-1α原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化HIF-1α蛋白和研究HIF-1α的生物学功能奠定了基础。

• 出版日期2009-10-30
• 单位中国医科大学