牛结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的原核表达及其在牛结核病检测中的应用

作者：徐贤坤; 熊毅; 龙剑明; 刘棋; 曾宪垠

来源：中国兽医科学, 2009, 39(09): 796-802.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2009.09.015

• 牛结核病
• 融合蛋白
• CFP-10
• ESAT-6 bovine tuberculosis
• fusion protein
• CFP-10
• ESAT-6

采用重组PCR技术从牛结核分枝杆菌AN5基因组DNA中扩增CFP10-ESAT6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a,构建了原核表达质粒pET-CFP10/ESAT6。重组子经酶切及测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳鉴定,获得约42 ku带有6×His蛋白标签的rHIS-CFP10/ESAT6融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的40%。用HIS蛋白纯化柱纯化该蛋白,Western-blot分析显示,该融合蛋白能与抗牛结核分枝杆菌阳性血清发生特异性反应。将重组的该融合蛋白用于刺激单次皮内变态反应阳性牛全血,可以产生高水平的IFN-γ,其特...

• 出版日期2009
• 单位四川农业大学; 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心; 广西大学